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  • 第118期TLC薄層層析技術總結

    2019年04月23日來源:管理員
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    薄層層析(TLC)是常用的一種分離和分析方法。

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    原理:利用吸附劑對樣品中各組分吸附能力不同,及展開劑對它們的解吸附能力的不同,使各組分達到分離的目的。

    特點:微量、快速、簡單、節省。

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    分類:

    吸附薄層層析(硅膠)

    分配薄層層析(纖維素)

    薄層離子交換層析(離子交換劑)

    薄層凝膠層析(分子篩凝膠)

    硅膠:表面帶有硅醇基(-Si-OH),呈弱酸性(pH=4.5),活性硅膠適合分離酸性或者中性化合物,如酚類、有機酸、甾體化合物以及氨基酸類,是基于吸附作用。非活性硅膠含有一定的水,在分離色素時是基于分配作用。

    氧化鋁:弱堿性(pH=9)、酸性(pH=4)及中性(pH=7.5)三種氧化鋁。弱堿性氧化鋁用來分離中性或堿性化合物;中性氧化鋁適用于酸性及對堿不穩定的化合物的分離;酸性化合物可用酸性氧化鋁分離。

    化學鍵合相(C18、C8等)

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    各種硅膠板的區別:

    硅膠G:含有13%煅石膏(GYPSUM)粘合劑的硅膠。

    硅膠H:不含粘合劑的硅膠。

    硅膠HF254:不含粘合劑,含有一種無機熒光劑(如錳激活的硅酸鋅),在254nm波長紫外光下,呈強烈黃綠色熒光。

    硅膠GF254:含有煅石膏粘合劑,含熒光劑,在254nm波長紫外光下,呈強烈黃綠色熒光。

    硅膠HF254+366:不含粘合劑,在254nm與366nm波長有熒光。

    硅膠PF254:制備型,在254nm有熒光(有熒光劑,適用于不發光不易顯色物質的制備與分離)。

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    幾種硅膠板標注方法:

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    原點間距0.8~1mm,底邊距離0.5~0.8cm即可。

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    反應液的取樣:

    一般極性溶劑體系

    強極性溶劑體系

    需要淬滅的體系

    強堿、酸性物質

    可以直接取樣,也可以稀釋后取樣。

    最好簡單后處理(加水和有機溶劑萃?。┮院笕?。

    處理(如加水或酸和有機溶劑)后取樣

    最好中和后取樣

    Note:1. 產品在水相或有機相

    ????? 2. 有無沒有溶解的固體

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    點樣:

    手動點樣:靈活方便,常用于各種TLC鑒別中。

    自動點樣:重現性和準確性好,常用于薄層掃描法的含量測定。

    點樣量:原點位置的負荷有限,體積0.5~10ul,濃度通常為0.5~2mg。直徑3mm以內。

    樣品溶劑:原則上應選擇對樣品可以溶解,但溶解度不是很大的溶劑。

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    Note:1. 點樣的濃度要控制適當。

    ????? 2. 點的斑點較小,展開的TLC分離度好。

    ????? 3. 0.3mm毛細點有機相,0.5mm點水較方便。

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    點樣常見問題:

    1.?????? 點樣量太大。展開劑不能全部負載。

    2.?????? 太濃了。展開劑從原點外圍繞行。

    3.?????? 濃。未分開。

    4.?????? 樣品溶劑殘留。吹干時應注意高溫破壞樣品。

    5.?????? 點樣量太少??床磺宄?。

    6.????? 樣品溶劑中溶解度很大。原點將變成空心圓。



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    ?展開劑的選擇原則:

    1.?????? 對所需成分有良好的溶解性。

    2.??????可使各成分間有較好的分離。

    3.?????? 待測組分的Rf在0.2~0.8之間。

    4.?????? 不與待測組分發生化學反應。

    5.?????? 沸點適中,粘度較小。

    6.?????? 展開后組分斑點圓且集中。

    7.?????? 混合溶劑最好新鮮配置。

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    常用展開劑極性大小順序:

    石油醚<二氯甲烷<乙醚<四氫呋喃<乙酸乙酯<丙酮<正丙醇<甲醇<水

    展開劑體系的選擇原則:

    ※? 一般極性的化合物:PE/EA體系

    ※? 極性較大的化合物:DCM/CH3OH體系


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    ※? 脂肪類胺化合物:在展開劑中加入0.1%(約為1滴)的氨水或三乙胺

    ※? 有羧基官能團存在的化合物:在展開劑中加入微量的醋酸(乙酸或甲酸的使用,一方面增大展開劑極性,另外也可以抑制硅膠上羥基的作用,減少拖尾)

    另外常用的混合體系:

    PE/DCM,PE/Acetone,Ether/DCM,EA/DCM,EA/CH3OH

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    展開方法:

    展開方法有單向、單向長板、多次多種極性展開、雙向展開等。


    顯色:

    一看:首先在日光下觀察,劃出有色物質的斑點位置

    二照:在紫外燈下觀察有無暗斑或熒光斑點

    三碘:大部分有機物會吸附碘可逆的產生棕色或黃色斑點

    四顯:既無色又無紫外吸收得物質,可以用顯色劑顯色

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    ?各種顯色劑及其配置方法:

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    硫酸溶液

    硫酸-水(1:1)溶液;硫酸-甲醇或乙醇(1:1)溶液;1.5mol/L硫酸溶液與0.5-1.5mol/L硫酸銨溶液

    大部分化合物

    高錳酸鉀

    1.5g KMnO4+10g K2CO3+1.25ml 10%NaOH

    含還原性基團化合物,比如羥基,氨基,醛

    磷鉬酸(PMA)

    乙醇5%磷鉬酸乙醇溶液,噴后120℃

    (可用加熱槍)緩慢烘烤

    還原性化合物顯藍色,再用氨氣熏,則背景變為無色

    茚三酮

    0.2g溶于乙醇100ml中。方法:噴后于110℃加熱。醋酸呈紅紫色斑點

    氨基酸

    氯化鐵

    1% FeCl3+50%乙醇水溶液

    氯化鐵

    硫酸鈰

    10%硫酸鈰(IV)+15%硫酸的水溶液

    生物堿

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    展開判斷:

    ※? 一般以目標產物的Rf值在0.4~0.6左右為佳。

    ※? 一般選用展開劑極性應從低到高原則

    異常情況:

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    TLC用途:

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    1.?????? 監測反應進程

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    2.?????? 官能團轉化與TLC極性大致表現的討論

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    3.?????? TLC和其他分析方法組合判斷
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    4.?????? 跟蹤萃取、重結晶等后處理的情況
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    5.?????? 摸索和確定柱層析時的洗脫條件的情況:
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    Note:1. Rf值在0.2左右的展開劑比例為沖洗劑的合適值。

    ?????? 2. 過柱時組分流出順序未必和TLC上點極性順序一致。

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    6.?????? 制備TLC
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    1)? 點板

    Note:a. 溶劑:極性小,溶解性好

    ????? b. 上樣量:40-60mg

    ??? c. 上樣的位置:距離兩端大約1cm,距離底邊大約2cm。

    2) 展開?

    Note:a. 展開之前要將溶劑吹干

    ????? b. 所用展開劑的極性較展小板的時候大

    3)? 顯色
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    4)? 疑似色帶的確定
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    5)? 刮板
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    Note:刮板后,在沒有得到結論前,不能輕易丟掉薄板。

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    6)? 洗脫
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    Note:洗脫劑應避免加入過多的甲醇,以免產物中混有大量的硅膠。

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